Посев на гемофильную инфекцию (Haemophilus influenzae) в Москве

Подробное описание исследования

Бактериологическое исследование позволяет достоверно определить наличие патогенов в образце, представленном для диагностики. Для выявления возбудителя на анализ принимаются мазки из глаз (левого и правого), носо- и ротоглотки, левого и правого уха, а также мокрота. Взятие биоматериала осуществляется в местах наиболее вероятного обнаружения бактерий, предварительно назначается лечащим врачом.

Посев на питательной среде считается положительным, если по истечении установленного времени на ней отмечается появление маленьких плоских непрозрачных колоний гемофильной палочки.

Haemophilus influenza (палочка Пфайффера) — бактерия малых размеров (не более 0,5 микрометра) округлой формы, неподвижная, способная образовывать защитную капсулу (некоторые штаммы — бескапсульные). Располагается на слизистых оболочках одиночно или скоплениями.

Передается исключительно от человека к человеку. Пути заражения: воздушно-капельный или, реже, контактный. Особенно гемофильной инфекции подвержены дети первых 4-5 лет жизни (90-95% от общего числа выявленных эпизодов) и пациенты возрастной группы 65+. Несмотря на тяжелое течение заболевания, возбудитель не обладает высокой заразностью. В большинстве случаев — при состоятельной иммунной защите — проникновение патогена в верхние дыхательные пути, так называемые входные ворота инфекции, ограничивается бессимптомным носительством. При этом носитель распространяет микроорганизмы при разговоре, чихании, кашле, являясь скрытым источником. Достоверно определить длительность инкубационного периода чрезвычайно сложно, поскольку болезнь может трансформироваться из носительства в манифестную форму, основная причина — снижение местного иммунитета.

Бескапсульная гемофильная палочка является компонентом нормальной микрофлоры слизистой оболочки носоглотки, по различным данным определяется у 70-90% людей. Капсулированные бактерии подразделяются на 6 подтипов (в зависимости от антигенного состава оболочки), особо заразным для человека является серотип b (Haemophilus influenza b, или HiB). Его представители обладают высокой способностью к адгезии («прилипанию») к слизистым оболочкам и являются единственными, способными проникать в системный кровоток.

Выделяют 2 формы болезни: инвазивную и неинвазивную. В первом случае палочка высевается в жидкостях, которые в норме должны быть стерильны: плевральная, перикардиальная, спинномозговая, кровь и пр.

Гемофильная инфекция представлена несколькими разновидностями. Наиболее частые проявления — отит (воспаление среднего уха) и ринофарингит (воспаление носовой полости и глотки). В первом случае заболевание плохо поддается лечению, что обусловлено особенностями возбудителя. Протекает с повышением температуры тела и резкой болезненностью на стороне поражения. Во втором отмечаются боль при глотании, покраснение и отечность слизистой оболочки глотки, обильное отделяемое из носа различного характера — от слизистого до гнойного — и интенсивности.

HiB служит одной из главных причин эпиглоттита среди детей, не прошедших вакцинацию от данной инфекции, — воспаления надгортанника, эластического хряща гортани, перекрывающего вход в дыхательные пути при глотании. Это заболевание протекает тяжело, с выраженной интоксикацией, стремительным нарастанием симптомов. Характеризуется интенсивными болями в горле, затруднением глотания и дыхания.

Также инфекция может проявляться гнойным менингитом (примерно в 50% случаев), пневмонией (по данным ВОЗ на 1 менингит, вызванный гемофильной палочкой, приходится примерно 5-10 случаев подтвержденного острого заболевания) и сепсисом.

Помимо перечисленных, наиболее частых вариантов протекания инфекционного процесса, встречаются также неинвазивные формы, в подавляющем большинстве случаев — конъюнктивит.

Бактериологический метод — один из наиболее надежных и достоверных способов определения возбудителя инфекции. Посев на гемофильную инфекцию при развитии отита, ринофарингита, эпиглоттита и других заболеваний позволяет оценить вклад Haemophilus influenza в развитие патологического процесса и подобрать оптимальную терапию.

Инфекция, вызываемая H. influenzae b

Возбудителем гемофильной инфекции является бактерия Haemophilus influenzae (или палочка Пфейффера) из семейства Pasteurellaceae (Hib). Длительное время гемофилы считались возбудителем гриппа, так как эта инфекция наиболее часто протекает в форме ринофарингита или ОРЗ без специфических особенностей, что и обусловило такое название. Бактерия представляет собой мелкую полиморфную палочку, иногда по форме напоминающую коккобациллу. Спор нет, имеет капсулу. Для культивации требует кровь, специальные добавки и витамины. В зависимости от различий химического строения и антигенных свойств капсулы выделяют 6 серотипов H. influenzae (серотипы a, b,c,d,e,f), а также бескапсульные штаммы.

Инфицирование гемофильными палочками редко приводит к заболеванию, однако спектр инфекционных поражений может быть чрезвычайно широк и зависит от серотипа возбудителя. У взрослых H.influenzae вызывает преимущественно очаговую бронхопневмонию, часто сочетающуюся с выраженным трахеобронхитом. Пневмония редко приобретает тяжелое течение, но в отдельных случаях может осложниться экссудативным плевритом, перикардитом, менингитом, артритом и т.п. Гемофилы входят в состав нормальной флоры верхних дыхательных путей, уровень бессимптомного носительства у детей достигает более 40%.

Наиболее патогенными свойствами и способностью вызывать тяжелые формы заболевания обладает H.influenzae тип b (Hib). Ее вирулентные свойства связаны преимущественно с капсульным полисахаридом и продукцией мембранотоксина.

При инвазивных формах заболевания возбудитель выявляется в стерильных жидкостях организма – СМЖ, крови, плевральной жидкости и др. К неинвазивным формам инфекции относится пневмония (без бактериемии), синусит, средний отит, ринофарингит, конъюнктивит. При генерализации инфекционного процесса развиваются инвазивные формы инфекции, наиболее частым проявлением которых является менингит (51–65%), септицемия – 12%, эпиглоттит – 10%, пневмония (с бактериемией) – 8% в структуре инвазивных Hib инфекций.

Наиболее часто Hib-инфекции подвержены дети в возрасте 6–48 мес, реже новорожденные и дети старше 5 лет. Подавляющее число заболевших приходится на возраст от 3 мес до 3 лет.

Факторами риска являются:

• посещение детских организованных коллективов (ясли, детские сады), особенно закрытого типа (дома ребенка, интернаты);
• искусственное вскармливание;
• иммунодефициты (первичные и вторичные, включая ВИЧ-инфекцию);
• хронические заболевания (сердца, легких, сахарный диабет).

Распространение инфекции происходит воздушно-капельным или бытовым путями передачи. В более редких случаях – при родах, от матери с гемофильной колонизацией генитального тракта.

Источником и основным резервуаром инфекции является только человек. В среднем среди здоровых детей бактерионосители составляют 2–5%, однако в окружении больного доля их может возрастать до 30% и выше. Уменьшение частоты носительства способствует снижению уровня заболеваемости. В странах, где введена вакцинация против Hib-инфекции, доля носителей в популяции здоровых детей снизилась до 0,5–1%.

Показания к обследованию

• Исследования по эпидемиологическим показаниям – среди контактных лиц в очаге Hib-инфекции (чаще всего Hib-менингит);
• профилактические исследования – с целью выявления уровня носительства в популяции, особенно в закрытых детских коллективах;
• диагностические исследования – при подозрение на заболевание эпиглоттитом, пневмонией, менингитом, септицемией, отитом, синуситом, гнойным артритом, остеомиелитом.

Материал для исследований

• Мокрота, лаважная жидкость, пунктаты (при подозрении на пневмонию); гнойное отделяемое, пунктаты; (средний отит, синусит); СМЖ, кровь; (менингит, менигоэнцефалит); кровь (септические состояния); пунктаты (гнойный артрит, остеомиелит); секционный материал; мазок из зева (обследование контактных в очаге Hib–менингита и проведение профилактических исследований) – культуральные исследования;
• СМЖ, кровь, пунктаты – обнаружение фрагментов ДНК;
• СМЖ, кровь – обнаружение АГ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает

микроскопию исследуемого материала, посев материала с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, определением антибиотикочувствительности; обнаружение генетических фрагментов ДНК Hib и АГ Hib в стерильных жидкостях организма.

Дифференциальная диагностика

проводится с микробными агентами:

• При эпиглоттите – с возбудителями вызывающими истинный и ложный круп (C.diphtheriae, S.pyogenes, различные вирусы);
• при менингите – с возбудителями, вызывающими гнойный менингит (N.meningitidis, S.pneumoniae, S.aureus и др.);
• при пневмонии – S.pneumoniae, C.pneumoniae, M.pneumoniae, L.pneumophila, S.aureus, семействомEnterobacteriaceae, вирусами гриппа;
• при отите и синусите – S.pneumoniae, Ps.aeruginosa, S.aureus, M.catarrhalis, S.pyogenes, дрожжевые грибки родаCandida;
• при гнойном артрите, остеомиелите – S.aureus, E.coli, анаэробная инфекция.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики.

Микроскопические исследования используют для выявления гемофильных палочек в разных видах биологического материала: ликворе, крови, пунктатах стерильных локусов, пунктатах нестерильных локусов (мокрота, мазки из зева, придаточных пазух, уха и др.). Микроскопия, как самостоятельное исследование, обычно не проводится, так как имеет малую диагностическую ценность. Микроскопическое исследование может использоваться только для решения вопроса пригодности мокроты или лаважной жидкости для посева (в мазке должно находиться более 25 сегментоядерных лейкоцитов и менее 10 эпителиальных клеток в поле зрения), а также определения микробных ассоциаций.

Для посева с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, определением антибиотикочувствительности используют материалы стерильных локусов (кровь, ликвор, синовиальную, перикардиальную, плевральную жидкости) и различный материал из нестерильных локусов.

Важной проблемой для лечения Hib-инфекции является рост устойчивости β-лактамным антибиотикам, в первую очередь ампициллину, обусловленных продукцией плазмидных β-лактамаз. Кроме того, в мире отмечается увеличение резистентности к гентамицину, эритромицину, левомицетину.

При определении чувствительности к антибиотикам культуры, выделенной из нестерильных локусов, в первую очередь исследуют устойчивость к ампициллину, ампициллину/сульбактаму, ко-тримоксазолу. Желательно провести тест на продукцию β-лактамаз с нитроцефином. В качестве дополнительных препаратов для характеристики штамма в исследование включают цефалоспорины II–III поколения, тетрациклины, макролиды, хлорамфеникол, фторхинолоны.

Штаммы, выделенные из ликвора и крови, исследуют на чувствительность к ампициллину, цефоласпоринам III поколения, карбапенемам, хлорамфениколу, другие препараты (тетрациклины, макролиды, фторхинолоны) добавляются для более полной характеристики культуры.

Обнаружение АГ Hib в стерильных жидкостях организма (ликворе, крови) выполняют при использовании наборов реагентов, основанных на реакции латекс-агглютинации или коагглютинации.

Обнаружение фрагментов ДНК Hib проводят методом ПЦР. Исследование основано на обнаружении специфического фрагмента гена bex A, кодирующего связанный с капсулой белок возбудителя и проводится только с материалом, полученным из стерильных локусов (СМЖ, кровь, пунктаты)

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований.

Диагноз Hib-инфекция считается установленным в случае:

• изоляции бактерий H.influenzae тип b из образцов биоматериала;
• выявления бактерий, сходных по морфологии с гемофильными палочками (полиморфных грам-отрицательных палочек), в образцах биоматериала, взятых из стерильных локусов и получения положительного результата выявления АГ в реакции латекс-агглютинации, используемой для выявления АГ;
• обнаружения специфических фрагментов ДНК Hib методом ПЦР в образцах биоматериала, взятых из стерильных локусов.

Что ещё назначают с этим исследованием?

Менингококк, гемофильная палочка, стрептококк (Neisseria meningitidis, haemophilus influenzae, streptococcus pneumoniae, ПЦР) соскоб, кач.

19.52.2. Соскоб 2 дня

870 ₽ Добавить В корзину

Определение чувствительности возбудителя к антибактериальным препаратам (ддм)

01. 1 день

490 ₽ Добавить В корзину

Определение чувствительности возбудителя к расширенному спектру антибактериальных препаратов

02. 2 дня

600 ₽ Добавить В корзину

Определение чувствительности возбудителя к расширенному спектру антибактериальных препаратов, с определением минимальной ингибирующей концентрации (МИК, МПК)

13. 2 дня

960 ₽ Добавить В корзину

Посев отделяемого верхних дыхательных путей на микрофлору (нос, зев)

120.2. Соскоб 4 дня

690 ₽ Добавить В корзину

Использованная литература

1. Озерецковский, Н.А., Немировская, Т.И. Вакцинация против гемофильной инфекции типа b в Российской Федерации и за рубежом. Эпидемиология и вакцинопрофилактика, 2021. — Т. 15(1). — С. 61-6.
2. Королева, И.С. Эпидемиологические особенности носительства Haemophilus influenzae типа b. Эпидемиология и инфекционные болезни, 2000. — № 3. — С.15-19.
3. Haemophilus influenzae type b (Hib) Vaccination Position Paper. WHO. Weekly epidemiological record, 2013. — Vol. 88(39). — P. 413-28.
4. Watt, J., Wolfson, L., O’Brien, K. et al. Burden of disease caused by Haemophilus influenzae type b in children younger than 5 years: global estimates. Lancet, 2009. — Vol. 374(9693). — P. 903-11.

Haemophilus influenzae (гемофильная палочка)

Гемофильная палочка

или
палочка Пфейфера
или
Пфайфера
, или
палочка Афанасьева-Пфейффера
(
Haemophilus influenzae
) — вид грамотрицательных бактерий. Возбудитель серьёзных заболеваний человека. Неподвижная овоидная палочковидная коккобацилла, размером 0,2-0,3 на 0,3-0,5 мкм. Располагается одиночно, попарно и скоплениями, иногда образует капсулу. Жгутиков не имеет. Источником и объектом поражения
Haemophilus influenzae
является только человек. Резервуаром инфекции чаще всего оказываются бактерионосители или больные острыми респираторными заболеваниями, протекающими в легкой или клинически невыраженной форме, когда они не изолируются. Частота бактерионосительства в популяции здоровых детей составляет от 60 до 90% для бескапсульных форм
Haemophilus influenzae
, и наряду с
Streptococcus pneumoniae
является компонентом обычной микрофлоры верхних дыхательных путей у детей в возрасте до 5 лет. Частота носительства бескапсульных форм
Haemophilus influenzae
среди здоровых детей раннего возраста составляет чуть менее 50 % (В.В. Малеев и др.).

По структуре К-антигена все известные штаммы Haemophilus influenzae

разделяют на 6 серотипов (A-F). Основную эпидемическую опасность представляет серотип типа B (часто обозначаемый аббревиатурой HiB).

Заболевания, вызываемые Haemophilus influenzae

Инфекция, вызываемая Haemophilus influenzae
, представляет серьёзную медицинскую проблему из-за значительного распространения её различных клинических форм, частой генерализации, тяжелого течения заболеваний с нередким развитием осложнений и летальностью до 30%. Наиболее часто
Haemophilus influenzae
является этиологическим фактором возникновения гнойных менингитов, пневмоний, эпиглотитов, отитов, артритов, целлюлитов, пиелонефритов, конъюнктивитов у ослабленных лиц, преимущественно у детей грудного возраста и престарелых; нередко заболевание принимает генерализованный характер.

Многолетний клинико-бактериологический мониторинг, проведенный в НИИ педиатрии НЦЗД РАМН позволил установить, что микробный спектр при хронических бронхолегочных заболеваниях у детей в периоде обострения представлен в основном двумя пневмотропными микроорганизмами. При этом Haemophilus influenzae

является доминирующим причинным фактором инфекционного процесса, составляя 61–70% , из которых в 27% случаев она находится в ассоциации с
Streptococcus pneumoniae
(Середа Е.В., Катосова Л.К.).

Острое инфекционное заболевание, клинически проявляющееся охриплостью и стенозом дыхательных путей (вплоть до асфиксии), — эпиглоттит, этиологическим фактором которого в большинстве случаев является Haemophilus influenzae

, тип В (Солдатский Ю.Л., Онуфриева Е.К.).

Пневмония

Пневмония является одной из форм острой респираторной инфекции, воздействующей на легкие. При пневмонии альвеолы лёгких заполняются гноем и жидкостью, что делает дыхание болезненным и ограничивает поступление кислорода.
Пневмония является важнейшей отдельно взятой инфекционной причиной смертности детей во всем мире. В 2013 году от пневмонии умерли 935 тысяч детей в возрасте до 5 лет. Она является причиной 15% всех случаев смерти детей в возрасте до 5 лет во всем мире.

Существует несколько путей распространения пневмонии. Бактерии, которые обычно присутствуют в носе или горле ребенка, могут инфицировать легкие при их вдыхании. Они могут также распространяться воздушно-капельным путем при кашле или чихании. Кроме того, пневмония может передаваться через кровь, особенно во время родов или сразу после них.

У детей в возрасте до 5 лет с симптомами кашля и/или затрудненного дыхания, сопровождающимися или не сопровождающимися высокой температурой, диагноз пневмонии ставится при наличии учащенного дыхания или втяжения нижней части грудной клетки, если грудная клетка втягивается или отводится назад при вдохе (у здорового человека при вдохе грудная клетки расширяется).

В рамках проспективного когортного исследования CAPNETZ, выполненного в Германии, установлено, что Haemophilus influenzae

является весьма распространённым возбудителем внебольничной пневмонии, особенно у пациентов с предшествующей вакцинацией пневмококковой вакциной и наличием сопутствующей патологии респираторного тракта. Тяжесть заболевания и наличие хронической патологии печени являются факторами риска развития более низкой частоты раннего клинического ответа на терапию (Forstner C. et al. Infect. 2021 Feb 29).

Пневмонию, вызванную бактериями, можно излечить антибиотиками. Предпочтительным антибиотиком является амоксициллин в диспергируемых таблетках (ВОЗ. Инф. бюлл. №131).

Haemophilus influenzae в систематике бактерий

Вид Haemophilus influenzae
относится к роду гемофилюс (лат.
Haemophilus
), который входит в семейство
Pasteurellaceae
, порядок
Pasteurellales
, класс гамма-протеобактерии (лат.
γ proteobacteria
), тип протеобактерии (лат.
Proteobacteria
), царство Бактерии.

Вакцины и антимикробные средства, активные в отношении Haemophilus influenzae

Cледующие антибиотики (из числа представленных в настоящем справочнике) активны в отношении Haemophilus influenzae:
ципрофлоксацин
,
левофлоксацин, норфлоксацин, офлаксацин, моксифлоксацин, доксициклин, тетрациклин, амоксициллин, джозамицин, рифабутин, азитромицин.

Haemophilus influenzae

сохраняет высокую чувствительность к ампициллину, амоксициллину, амоксициллину/клавуланату, азитромицину, левомицетину, аминогликозидам и цефалоспоринам II–III поколений. Почти все штаммы
Haemophilus influenzae
обладают резистентностью к таким антибиотикам, как оксациллин (84 %), олеандомицин (97 %), линкомицин (100 %), что говорит о нецелесообразность их применения в этих случаях (Середа Е.В., Катосова Л.К.).

По мнению группы исследователей, выполнивших многоцентровое проспективное исследование ПеГАС (О.В. Сивая и др.), бета-лактамы (амоксициллин, амоксициллин/клавуланат, цефтриаксон, цефотаксим, цефтибутен), макролиды, левофлоксацин и моксифлоксацин являются наиболее активными препаратами в отношении Haemophilus influenzae

в России. Несмотря на высокую активность в отношении
Haemophilus influenzae
тетрациклина и хлорамфеникола, использование данных препаратов следует ограничить ввиду низкого профиля безопасности. Учитывая низкую активность ко-тримоксазола, данный препарат не рекомендуется использовать для эмпирическиой терапии инфекций, вызванных гемофильной палочкой.

Необходимо отметить, что, как пишет проф. Яковлев С.В. (2015), в отношении активности макролидных антибиотиков против Haemophilus influenzae

много лет активно ведутся дискуссии. По данным справочных пособий и инструкций по медицинскому применению, макролиды проявляют активность против
Haemophilus influenzae
, однако интерпретация результатов оценки чувствительности
Haemophilus influenzae
к макролидам является спорным моментом. Минимально подавляющая концентрация (МПК) всех макролидов в отношении
Haemophilus influenzae
существенно выше, чем в отношении грамположительных бактерий, а также по сравнению с МПК бета-лактамов. Этот факт объясняется наличием у
Haemophilus influenzae
конститутивно функционирующей системы активного выведения макролидов. Фармакодинамические расчеты свидетельствуют, что концентрации макролидов, создающиеся в очаге инфекции, недостаточны для эрадикации
Haemophilus influenzae
. Приведенные факты в достаточной степени подтверждают точку зрения европейских экспертов EUCAST о том, что
Haemophilus influenzae
следует считать природно-устойчивой к макролидным антибиотикам.

В Анатомо-терапевтической-химической классификации (АТХ) в разделе «J07 Вакцины» имеется отдельный раздел «J07AG Вакцины против Haemophilus influenzae

B». В России допущены к применению три препарата–вакцины для профилактики заболеваний, вызванных
Haemophilus influenzae
типа b: Хиберикс (англ.
Hiberix
), Акт-ХИБ (англ. Act-HIB) и «Вакцина гемофильная тип b конъюгированная» (производство Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии).

Инструкция фирмы-производителя вакцины против Haemophilus influenzae

тип
b
для США на английском языке, pdf: «Hiberix », GlaxoSmithKline.

Кроме того, существуют комплексные вакцины, предназначенные для профилактики целого ряда инфекций, в том числе, вызываемых Haemophilus influenza

, например:

• Пентаксим — вакцина для профилактики дифтерии и столбняка адсорбированная, коклюша ацеллюлярная, полиомиелита инактивированная, инфекции, вызываемой Haemophilus influenzae
  типа b конъюгированная (фирмы Sanofi Pasteur)
• Инфанрикс Гекса — вакцина для профилактики дифтерии, столбняка, коклюша (бесклеточная), полиомиелита (инактивированная), гепатита В комбинированная, адсорбированная в комплекте с вакциной для профилактики инфекции, вызываемой Haemophilus influenzae
  типа b (фирмы GlaxoSmithKline)

Haemophilus influenzae в МКБ-10

Haemophilus influenzae
упоминается:

• в «Классе I. Некоторые инфекционные и паразитарные болезни» Международной классификации болезней МКБ-10, в блоках:
• «A30-A49 Другие бактериальные болезни», в рубриках «A41.3 Септицемия, вызванная Haemophilus influenzae
  » и «A49.2 Инфекция, вызванная
  Haemophilus influenza
  , неуточненная»
• «B95-B98 Бактериальные, вирусные и другие инфекционные агенты», в рубрике «B96.3 Haemophilus influenzae
  [
  H. influenzae
  ] как причина болезней, классифицированных в других рубриках». Код МКБ-10 B96.3 предназначен для использования в качестве дополнительного, когда целесообразно идентифицировать инфекционных агентов болезней, классифицированных в других рубриках

На сайте GastroScan.ru в разделе «Литература» имеются подразделы «Микрофлора, микробиоценоз, дисбиоз (дисбактериоз)» и «Бронхолёгочные заболевания, ассоциированные с заболеваниями ЖКТ», содержащий публикации для профессионалов здравоохранения.

В видео «Семиотика кашля у детей», ориентированном на педиатров, профессор Д.Ю. Овсянников затрагивает проблемы, связанные с бактериальным бронхитом у детей, ассоциированным, в частности, с Haemophilus influenzae

.
Назад в раздел